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叶酸测定中样品的收集,处理及保存的方法
点击次数:203 发布时间:2019-03-13
     叶酸测定中样品的收集,处理及保存的方法
  叶酸测定试剂盒试验原理
  叶酸测定试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
  叶酸测定试剂盒样品收集,处理及保存方法:
  1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
  2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
  3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
  5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
  叶酸测定试剂盒怎么用的实验操作步骤如下:
  1、标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
  2、加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  4、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  7、温育:操作同3。
  8、洗涤:操作同5。
  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值),测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  以上便是今天关于叶酸测定中样品的收集,处理及保存的方法的全部分享了,希望对大家今后使用本设备能有帮助。
  
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