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2017弧菌检测的进展
点击次数:128 发布时间:2019-06-10

近年来,创伤弧菌造成的感染事件时常发生。创伤弧菌已被列为海产品相关的一种重要病原菌,并已跻入弧菌三大病原菌之一。我国关于弧菌的检测标准主要有《GB 4789.7—2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》、《食品安全国家标准   食品微生物学检验 创伤弧菌检验(征求意见稿)》(2017年10月发布)等。

 

2017年,ISO更新了弧菌的检测标准,即ISO 21872-1-2017 食品和动物饲料微生物学 潜在肠道致病性弧菌属检测的水平方法 第1部分:副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌的检测。该标准取代了2007年旧的版本,主要变化是引入了可选择的弧菌的分子鉴定方法(包括副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌),并在附录E上增添了方法评价。但实际上,检测方法上,ISO和我国标准还有一些不一样的地方。

 

ISO指出,对增菌孵育温度的调整,可改善食品中弧菌的回收率。例如,在新鲜产品中,增菌时孵育41.5℃可使副溶血性弧菌和霍乱弧菌的回收率提高。在冷冻食品(-18℃以下)或腌制食品中,创伤弧菌、副溶血性弧菌和霍乱弧菌的增菌温度在37℃可使回收率提高。因此,在首次增菌环节,ISO推荐的增菌液碱盐蛋白胨水(ASPW)的孵育温度为41.5℃或37℃,6h。如果在冷冻或腌制品中三种菌都测,则是在37℃孵育。如果只测创伤弧菌(不论食品类型),也是37℃孵育。如果在新鲜食品中只检测副溶血性弧菌或霍乱弧菌,则增菌温度为41.5℃。

 

ISO还推荐了二次增菌,也是用ASPW,原则同上。分离菌则推荐同时采用TCBS和另一种选择性固体培养基。对于阳性菌落,验证可采用生化试验或PCR、qPCR。生化试验包括赖氨酸脱羧、精氨酸二氢化酶试验,-半乳糖苷酶试验、吲哚试验等。

 

世界知名微生物产品供应商HiMedia公司开发的HiCrome弧菌显色培养基(货号MV1682),可同时分离鉴别副溶血性弧菌和霍乱弧菌。该显色培养基为高(碱性)pH,有助于选择性分离弧菌属。它根据细菌β-半乳糖苷酶和培养基中所包含底物反应的原理,霍乱弧菌菌落呈紫色,副溶血性弧菌菌落呈蓝绿色(见下图)。

 

该弧菌分离培养基用植物蛋白胨取代动物蛋白胨,更加环保,也避免了疯牛病风险,同时价格低于同类进口产品。对于阳性菌落,还可进一步用HiMedia公司生产的弧菌生化鉴定条(货号KB007)来鉴定。该鉴定条包含了12种传统的生化试验,包括伏普试验、精氨酸脱羧试验、盐耐量试验(1%)、ONPG试验

、柠檬酸盐利用试验、鸟氨酸脱羧试验、甘露醇发酵试验等,操作方便,结果准确,可鉴定28种弧菌,具体如下:

 

河口弧菌(V. aestuarianus)

溶藻弧菌(V. alginolyticus)

坎氏弧菌(V. campbellii)

鲨鱼弧菌(V. carchariae)

霍乱弧菌(V. cholerae)

辛辛那提弧菌(V. cincinnatiensis)

双氮养弧菌(V. diazotrophicus)

费氏弧菌(V. fischeri)

河流弧菌(V. fluvialis)

弗尼斯弧菌(V. furnissii)

产气弧菌(V. gazogenes)

哈维氏弧菌(V. harveyi)

霍氏弧菌(V. hollisae)

火神弧菌(V. logei)

地中海弧菌(V. mediterranei)

麦氏弧菌(V. metschnikovii)

拟态弧菌(V. mimicus)

飘浮弧菌(V. natriegens)

沙蚕弧菌(V. nereis)

黑美人弧菌(V. nigripulchritudo)

病海鱼弧菌(V. ordalii)

东方弧菌(V. orientalis)

副溶血性弧菌(V. parahaemolyticus)

解蛋白弧菌(V. proteolyticus)

杀鲑弧菌(V. salmonicida)

灿烂弧菌(V. splendidus)

塔氏弧菌(V. tubiashii)

创伤弧菌(V. vulnificus)

 

缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商,在微生物培养和检测领域,一如既往地为您带来优质的服务。

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