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各种Vero细胞培养液的成分比较
点击次数:351 发布时间:2018-12-26

近10年来,低血清和无血清Vero细胞培养基的开发受到了重视,一些研究机构发布了自己的研究结果。其中,无血清细胞培养基开发的难度大,因为无血清培养系统中的细胞对于极端的pH值、温度、渗透压、机械力和酶处理更为敏感。换用无血清培养基时,每次传代常需采用较高的密度接种细胞,有时细胞还需要驯化。性能的细胞培养基则要求能促进细胞的生长、存活率和细胞活力,培养的病毒增殖较快,同时价格不过于昂贵。

 

许多低血清和无血清Vero细胞培养基以传统的合成培养基为基础。有机构研究了DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM∶DMEM/F12四种培养基对流感病毒增殖的影响1。具体过程为:在上述培养基中分别加入浓度为1.0μg/ml的 TPCK胰酶,配制病毒培养液,调整pH为8.0。将T-225细胞培养瓶中长成致密单层的SFM-Vero细胞,经0.125%的胰蛋白酶消化后传代后,置37℃培养36h;洗液洗涤3次,以MOI = 0.1接种H5N1流感病毒,33℃吸附1h;加入病毒培养液,置33℃培养72h,收获病毒液,测定血凝效价。结果显示,细胞培养时间为36 h。以DMEM/F12为基础培养基时,病毒收获液的血凝效价均高于其他培养基,M199仅次于DMEM/F12。

 

又有机构比较了含10%新生牛血清的M199和MEM培养基对Vero细胞生长的影响。发现M199显著好于MEM。M199培养的细胞活力为94.35%,MEM为80.50%,M199的细胞浓度为60万/ml,而MEM为47.5万/ml2。

 

由于细胞培养基的成分较为复杂,且各个成分对细胞培养存在一定的协同作用,故以上结论仅作一定程度上的参考。DMEM/F-12是DMEM和F-12以1:1的比例混合而成,F-12配方则是以Ham's F-10 培养基为基础,提高了胆碱、肌醇、腐胺和几种氨基酸的浓度,初是用于在无血清的条件下培养 CHO 细胞。M199培养基则常用于疫苗生产、病毒学以及多种非转化细胞的培养。初的开发目的是找到一种成分明确的、不含动物来源成分的培养基。有报道将M199改良后,Vero细胞培养效果优于M199,且病毒滴度更高3。

 

SFRE M199即是一款M199的改良型,初用于原代狒狒肾(Bak)细胞的生长和维持,后用于Vero细胞的贴壁培养。它在M199培养基基础上添加了胰岛素、丙酮酸钠、硫酸锌,并提高了精氨酸-盐酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸和葡萄糖的浓度。它还添加了半乳糖,以避免乳酸过度积累,并使pH值在细胞延长的维持期内,保持在生理范围。国际知名生物科学公司HiMedia生产有SFRE M199的1型和2型。二者均含有L-谷氨酰胺、半乳糖和葡萄糖。SFRE M199-2(货号AT090)含有Earle's盐,而SFRE M199-1含有Hank盐。两种盐的主要差别在于碳酸氢钠的水平, 碳酸氢钠在Eagles (2.2g/L)比在Hanks (0.35g/L) 中高。选用哪种取决于培养环境中的CO2浓度。

 

SFRE M199-1与DMEM/F-12的成分作比较,可以发现,SFRE M199-1不含DMEM/F-12所含有的硫酸铜、硫酸亚铁、亚油酸、腐胺、硫锌酸,但含有DMEM/F-12所不含的核苷类成分,如一磷酸腺苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶、脱氧核糖、硫酸腺嘌呤等,这些成分都与DNA的合成有关。另外,在一些共有成分上,两种培养基的成分浓度互有高低,如SFRE M199-1的甘氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、酪氨酸、生物素、丙酮酸钠的浓度都比DMEM/F-12要高,DMEM/F-12的异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、苏氨酸、泛酸钙、叶酸、吡哆醛盐酸盐、肌醇、葡萄糖、次黄嘌呤浓度比SFRE M199-1的成分浓度高。

 

目前,由于配方保密,关于Vero细胞无血清或低血清培养基的具体成分并未完全公开。由于改良型M199以及Vero细胞用SFRE M199培养时有报道3、4、5可见想见,SFRE M199取代M199来大规模培养Vero细胞,是将来发展的趋势。

 

HiMedia Laboratories公司是国际的培养基生产厂家,其生产通过了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP的质量管理体系认证。缔一生物作为中国区代理商,在生物制药,疫苗生产,科研,临床治疗等领域,提供有可靠的各种培养基及进口血清、支原体检测试剂等,持续不断地为中国生物产业的发展助力。

 

参考文献

1. 马磊,等.用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化.中国生物制品血杂志.2015,28(7):741-744

 

2. 薛英,等.不同培养基及不同的葡萄糖浓度对VERO细胞生长状况的影响.草食家畜.2010,12(4):70-71

 

3. 陈嘉雯,等.改良M199培养基在Vero细胞培养中的适用性.中国生物制品血杂志.2014,1(27):76-81

 

4. 吴长安. 无血清化学限定培养基对原代细胞的培养及其对病毒的敏感性. 国外医学.生物制品分册. 1981, 4:190-191

 

5. Jack Litwin. The growth of Vero cells as suspended aggregates in serum-free medium.Animal Cell Technology, 1992: 414-417

 

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