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国标GB4789.4—2016 沙门氏菌检验操作步骤
点击次数:142 发布时间:2018-10-22

沙门氏菌(Salmonella)为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌,它比大肠杆菌细, 也是肠杆菌科的一种重要的致病细菌。如果食用了被沙门氏菌污染的食品或者药品后,将会引起中毒,导致伤寒、肠热症、败血症和胃肠炎等疾病。

根据美国疾病控制和预防中心(CDC)的统计, 每年在美国由沙门氏菌引发食源性疾病常常居于食源性疾病的前列,目前我们食品监管部门依据国标GB4789.4—2016检测沙门氏菌,具体操作步骤如下:

 

1预增菌

无菌操作称取25g(mL)样品,置于盛有225mLBPW 的无菌均质杯或合适容器内,以8000r/min~10000r/min均质1 min~2 min,或置于盛有225 mLBPW 的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需调整 pH,用1 mol/mL 无菌 NaOH 或HCl调pH 至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶或其他合适容器内(如均质杯本身具有无孔盖,可不转移样品),如使用均质袋,可直接进行培养,于36 ℃±1 ℃培养8h~18h。

如为冷冻产品,应在45 ℃以下不超过15min,或2 ℃~5 ℃不超过18h解冻。

 

2增菌

轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mLTTB 内,于42 ℃±1 ℃培养18h~24h。

同时,另取1mL,转种于10mL SC内,于36 ℃±1 ℃培养18h~24h。

 

3分离

分别用直径3mm的接种环取增菌液1环,划线接种于一个BS琼脂平板和一个 XLD琼脂平板(或 HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板),于36℃±1℃分别培养40h~48h(BS琼脂平板)或18h~24h(XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板),观察各个平板上生长的菌落。

 

沙门氏菌属显色培养基平板,缔一生物为您推荐使用HiMedia公司(国际微生物公司)的沙门氏菌显色培养基(货号:MV1296),该培养基用植物蛋白胨取代了动物蛋白胨,安全性更高;并建立在Rambach培养基配方(2)基础上。Rambach的配方,是基于沙门氏菌代谢丙二醇产酸的原理。但该培养基仅仅用显色底物就能鉴别出沙门氏菌这一生化特性。它用于分离和鉴别沙门氏菌,与大肠菌群相区分,具有更高的敏感度。

 

 

沙门氏菌显色培养基(货号:MV1296)在35-37℃孵育24-48小时后观察到的培养特征

 

 

4生化试验

三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验、靛基质试验或选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。推荐使用HiMedia公司沙门氏菌生化鉴定试剂盒(KB011)

 

沙门氏菌生化鉴定试剂盒(KB011)包含的生化鉴定反应有:

甲基红试验(MR) VP试验 尿素酶 H2S产生 柠檬酸发酵 赖氨酸脱羧ONPG试验

乳糖发酵 阿拉伯糖发酵 麦芽糖发酵 甘露醇发酵卫矛醇发酵

 

5血清学鉴定

检查培养物有无自凝性、多价菌体抗原(O)鉴定、多价鞭毛抗原(H)鉴定、血清学分型(选做项目)

 

缔一生物作为HiMedia公司在中国的代理商,在微生物培养和检测领域,一如既往地为您带来优质的服务。

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