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叶酸测定培养基样本浓度的测定步骤
点击次数:176 发布时间:2018-09-26
   叶酸测定培养基样本浓度的测定步骤
  
  叶酸测定培养基用法
  
  称取本品9.4g,另称取50mg抗坏血酸,加热溶解于100ml蒸馏水中,分装试管,每管5ml,使沉淀物分散均匀,加入标准品或测试样品,用蒸馏水补体积至10ml,121℃高压灭菌5分钟,备用。
  
  正常人的血清叶酸水平正常为9.9ng/ml。在身体异常或得病时,叶酸水平会显著变化。叶酸干酪培养基采用干酪乳杆菌(ATCC7469)为测定用菌,用于叶酸的微生物法测定。该培养基是基于Flynn等人(1)的配方,并经Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于维生素测定的测定菌通常需要三种培养基:维持培养基、接种培养基和测定用培养基。后者通常是化学限定的培养基,包含所有测定菌生长所需的养分,但不含有待测的分子。类似的,叶酸干酪培养基包含干酪乳杆菌生长所需的所有成分,但不包含叶酸。因而,添加一系列浓度增加的叶酸,会观察到干酪乳杆菌生长反应的递增。
  
  样本叶酸浓度的测定步骤:如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他体积的制备好的血清提取物。加入5ml叶酸干酪培养基和足量的蒸馏水,使每个试管的总体积为10ml。15磅121°C灭菌5分钟。冷却试管并向每个试管中加入一滴接种液。35-37℃孵育18-24小时后进行浊度读数。读数前将试管冷藏15-30分钟以停止细菌生长。620nm检测吸光度。待测样品中的叶酸含量应根据标准曲线来确定,不过要考虑样品稀释度。
  
  叶酸测定培养基质量控制
  
  Ø外观——米黄色至黄色均一自由流动粉末
  
  Ø制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液,可能有轻微沉淀
  
  Ø配比浓度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水)水溶液,pH值为6.7±0.1
  
  ØpH值——6.60-6.80
  
  
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