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叶酸测定用培养基的应用
点击次数:227 发布时间:2018-05-09

应用

叶酸干酪培养基用于叶酸的微生物法测定。干酪乳杆菌(ATCC 7469)为测定用菌。

 

培养基组分

成分                                     克/升

无维生素酸水解酪蛋白                 10.000

葡萄糖                               40.000

醋酸钠                               40.000

磷酸氢二钾                           1.000

磷酸二氢钾                           1.000

DL-色氨酸                            0.200

天门冬酰胺                           0.600

抗坏血酸                             4.000

L-胱氨酸盐酸盐                       0.500

硫酸腺嘌呤                           0.010

尿嘧啶                               0.010

黄嘌呤                               0.020

脱水山梨糖醇单油酸酯络合物           0.100

还原型谷胱甘肽                       0.005

硫酸镁                               0.400

氯化钠                               0.020

硫酸亚铁                             0.020

硫酸锰                               0.015

核黄素(维生素B2)                   0.001

对氨基苯甲酸(PABA)                0.002

盐酸吡哆醇                           0.004

盐酸硫胺素                           0.0004

泛酸钙                               0.0008

烟酸                                 0.0008

生物素                               0.00002

zui终pH值 (25°C)                     6.7±0.2

 

质量控制

Ø外观——米黄色至黄色均一自由流动粉末

Ø制备好的培养基颜色和透明度——淡琥珀色透明溶液,可能有轻微沉淀

Ø配比浓度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水)水溶液,pH值为6.7±0.1

ØpH值——6.60-6.80

 

配置

称取9.4g干粉培养基溶于100ml蒸馏水,加入50mg抗坏血酸。加热至沸腾使培养基完全溶解。测定时,分装至每管为5ml培养基(包含标准品和待测样品)。加蒸馏水,使总体积达到10ml。高压消毒15磅121°C 5分钟。立即冷却。

 

培养反应

采用干酪乳杆菌(ATCC 7469)进行叶酸的微生物法测定。35-37°C孵育16-18小时。

 

生长状况

可获得良好的生长。随着测定管叶酸标准品浓度升高(即 0, 0.1,0.2, 0.4, 0.6, 0.8,1ng),干酪乳杆菌生长逐渐递增,伴随着620nm处吸光度的增加。

 

文献

1. Flynn, Williams, ODell and Hogan, 1951, Anal. Chem., 23, 180.

2. Baker, Herbert, Frank, Pasher, Hunter, Wasserman and Sobotka, 1959,Clin. Chem., 5, 275.

3. Waters and Mollin, 1961, J. Clin. Path., 14, 335.

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